精子核蛋白染色试剂盒（苯胺蓝染色法）

·产品说明：

　　【品 名】

　　精子权威五联检：精子核蛋白染色试剂盒(苯胺蓝染色法)

　　【试剂特点】无须特殊仪器，简单、快速、准确。

　　【检验原理】

　　成熟精子的核蛋白成份为鱼精蛋白，富含精氨酸和胱氨酸残基；不成熟精子的核蛋白成份为组蛋白，富含赖氨酸残基。酸性条件下，苯胺蓝与赖氨酸残基结合生成紫蓝色化合物，从而指示不成熟核蛋白的存在，而核蛋白成熟的精子则染成红色。

　　【样本要求】液化后的新鲜精液标本

　　【操作方法】

　　1.试剂的准备

　　1)洗涤工作液的配制：A液(10×浓缩洗涤液)以蒸馏水10倍稀释，4℃保存备用；

　　2)洗脱工作液的配制：D液(10×浓缩洗脱液)以蒸馏水10倍稀释，4℃保存备用。

　　2.样本准备

　　1)新鲜精液标本置于37℃恒温水浴箱中完全液化。

　　2)精子的洗涤及稀释，方法如下：①在Eppendorf管中加入0.2—0.5ml的精液和洗涤工作液1ml，以一次性吸管反复吹打精子数次后，2000转离心5min，弃去上清液，保留管底精子沉淀团；②在Eppendorf管中加入洗涤工作液1.5ml，以一次性吸管反复吹打精子数次后，2000转离心5min，弃去上清液，保留管底精子沉淀团；③再次重复②的操作，离心结束后，弃去上清液。④在Eppendorf管中加入洗涤工作液约0.1—0.2ml，混合精子悬液。

　　3.检测步骤

　　1)取上述已制备好的精子悬液15μl，均匀涂布于防脱载玻片上，自然干燥。

　　2)在涂有待测精子的涂片区内，滴加B液(固定液)2—3滴，室温反应2min。

　　3)以流水轻轻冲去载玻片上的试剂(注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子)，甩去多余水份(注意防止涂片干燥)。

　　4)在涂有待测精子的涂片区内，滴加C液(染色液)2—4滴，室温反应5min。

　　5)以流水轻轻冲去载玻片上的试剂(注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子)，并甩去多余水份(注意防止涂片干燥)。

　　6)将载玻片竖直插入已盛有洗脱工作液的反应池中，使待测标本涂片区完全浸没于洗脱工作液中，室温反应5min。

　　7)以流水轻轻冲去载玻片上的试剂(注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子)，并甩去多余水份(注意防止涂片干燥)。

　　8)在涂片区内滴加E液(复染液)2—4滴，室温反应5min。

　　9)以流水轻轻冲去载玻片上的试剂(注意控制水流速度，以免洗脱涂片区内的精子)，迅速吹干玻片。(如果需要长久保存该涂片样本，可选择完成以下脱水步骤：分别将组织片依次置于70%、90%和100%乙醇中各2min，晾干。)

　　10)镜检。

　　【染色结果】

　　核蛋白不成熟的精子染色呈紫蓝色或紫色，核蛋白成熟的精子染色呈红色。

　　【参考值】DFI(单链DNA精子)＜10%为正常；当DFI＞25%时，受精率＜20%。

　　【注意事项】

　　1.受试者应按照WHO技术规范采集精液标本。

　　2.若精液标本粘稠度高或液化不完全，可导致检测结果非特异性假阳性。需要预先降低精液粘度或促进精液完全液化后，才能用于检测。

　　3.精子密度过高可能导致脱色不均匀，从而对检测结果产生不良影响；精子密度过低则不会影响检测结果；涂片时应避免涂布过于稠密。

　　4.精子洗涤不充分可影响显微镜观察结果。

　　5.染紫蓝色精子为核蛋白不成熟精子，染红色精子为核蛋白成熟的精子。由于精子核蛋白存在组蛋白-鱼精蛋白的过渡期，因此此类精子头部呈淡蓝色或紫色；精子头部局部染淡蓝色或紫色、顶体膜边缘染紫蓝色，均是精子不够成熟的表现。

　　6.镜下观察结果时，不要在精子堆集分布的区域计数，应选择精子散在分布的区域进行计数。

　　7.受检者所有样品均应视为潜在的传染源，检测完毕的样本、试剂均须作为医疗废物处理，避免污染环境。

　　8.精子核蛋白染色试剂盒为体外诊断试剂，检测结果仅供临床参考，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其它实验室检查及治疗反应等情况结合考虑。

　　【基本信息】

　　存储条件及有效期：试剂盒于2-8℃避光保存，有效期12个月。

• 联系方式
• 生产企业：

  三明市和众生物技术有限公司

• 联 系 人：陈先生
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